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| 紫外-可见分光光度法pka测定的原理与方法 作者：lwinna 来源：丁香园药物分析版 |
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紫外-可见分光光度法测定pKa 原理： 由于弱酸在强酸性溶液中全为分子型，在强碱溶液中全部为离子型。 分别测定其吸收系数，再测定在适宜pH值下的吸光度即为离子型吸光度和分子型吸光度的和。 推导： 在强碱下测定吸光度 即A离子型：离子型吸光度 在强酸下测定吸光度 即A分子型：分子型吸光度 A=A离子型+A分子型 根据比尔定律 由于A=ε*l*C（l吸收池厚度，C物质的量浓度） 所以A=ε分子型*l*C分子型+ε离子型*l*C离子型 在强酸溶液中测定摩尔吸收系数 ε分子型=A分子型/l/C总 在强碱溶液中测定摩尔吸收系数 ε离子型=A离子型/l/C总 故A= A分子型/C总* C分子型+ A离子型/C总* C离子型 同时C分子型=C总- C离子型 C离子型=C总- C分子型 分别带入上式后整理后分别得到 C分子型=（A-A离子型）*C总/（A分子型- A离子型） C离子型=（A分子型-A）*C总/（A分子型- A离子型） 由于pKa=pH+lg（C分子型/C离子型） 则pKa=pH+lg[（A-A离子型）*C总/（A分子型- A离子型）/（A分子型-A）*C总/（A分子型- A离子型）]= pH+lg((A-A离子型)/(A分子型-A)) 最终，调整一下 pKa=pH+lg((A离子型-A)/(A-A分子型)) 测定七次以上即可 测定方法 基于上述推导，在强碱下测定吸光度即为A离子型，在强酸下测定吸光度即为A分子型。 选择七个不同的pH值吸光度为A按照pKa=pH+lg((A离子型-A)/(A-A分子型))计算，取平均值。 注意： 1 测定波长选择最大吸收 2 缓冲液的pH值与pKa相近。 3 精确测定需要测定七次以上。 |
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